고객 성공 스토리
워싱턴 대학: 면역학 및 기타 연구를 위한 이중 레이저 다광자 현미경
도전
박사. 세인트 루이스에 있는 워싱턴 대학교 의과대학 부교수이자 생체 이미징 코어 소장인 Mark Miller는 특히 면역에 대한 생체 내 연구에 사용하기 위해 다광자 현미경을 구축하고 사용해 온 오랜 역사를 가지고 있습니다. 여기에는 백혈구 밀매 및 항원 제시에 대한 획기적인 조사와 컴퓨터 생물학의 새로운 활용이 포함됩니다. 예를 들어, 그의 그룹은 APC(항원 제시 세포) 표적에 비해 T 세포 군집이 케모카인 구배에 의해 지배되지 않고 오히려 무작위 움직임으로 시작된다는 것을 처음으로 밝혔습니다(Miller et al., Science 2002, Miller et al., PNAS, 2004, Miller et al. JEM, 2004).
2012년부터 그는 In Vivo Imaging Core의 이사직을 맡아 학제간 연구자들이 생체 내 감염성 질병 연구에서 단일 세포 이미징을 수행할 수 있도록 개방형 접근이 가능한 범용 다광자 현미경을 구축하기 시작했습니다. 주요 목표는 여러 형광단을 사용한 유연한 실험을 가능하게 하기 위해 독립적으로 조정 가능한 두 개의 파장(Zinselmeyer et al., Methods Enzymology, 2009)을 포함하는 것이었습니다. 다른 전제 조건은 광범위한 사용자 기반을 지원하기 위한 레이저 사용 편의성과 효율적인 다중 사용자 예약을 가능하게 하는 높은 안정성이었습니다.
해결책
박사. Miller는 결국 상업적으로 이용 가능한 스코프를 수정하고 두 개의 스코프를 장착하기로 결정했습니다.카멜레온 비전 II 레이저, 부분적으로는 이전에 대한 광범위하고 긍정적인 경험 때문입니다.카멜레온 울트라 레이저그의 면역학 연구실에서요. 그는 티타늄:사파이어 레이저 중 가장 긴 파장 직접 튜닝 범위를 제공하는 Vision II 모델을 선택했다고 덧붙였습니다. "이를 통해 우리 공동연구자들은 자가형광을 위한 800nm, 녹색(및 청록색) 형광 단백질을 위한 900nm, mfruit 시리즈의 적색 형광 단백질과 함께 사용할 수 있는 1040nm를 포함한 광범위한 여기 옵션을 제공합니다. 긴 파장 범위는 긴 획득 시간이 필요한 살아있는 조직 실험에서 자가형광 및 광손상을 최소화하는 데에도 유용합니다."
박사. Miller는 혁신적인 서비스/교체 계약이 레이저 선택의 또 다른 핵심 요소였다고 지적합니다. "초기 세대 레이저에는 몇 가지 문제가 있었습니다. 하지만 바카라 카지노는 즉시 100% 지정된 성능으로 되돌려 놓았습니다. 문자 그대로 교체 레이저를 제 연구실로 배송하는 시간뿐이었습니다." 그는 Vision II 레이저에 전혀 문제가 없었지만 그럼에도 불구하고 계약이 귀중한 "마음의 평화"를 제공하고 분주한 이미징 코어의 논스톱 실행을 허용한다고 설명합니다.
결과
박사. Miller는 듀얼 레이저 현미경이 성능, 신뢰성 및 작동 단순성 측면에서 절대적인 성공을 거두었다고 말합니다. 새로운 사용자는 일반적으로 단 몇 시간의 실습 교육 후에 시스템을 작동할 수 있습니다. 이 장비는 다양한 주제를 다루는 수십 개의 출판물에 대한 데이터를 생성했습니다. Miller 박사는 생체내 다광자 이미징 방법을 사용해 온 오랜 역사를 담은 수많은 이미지와 동영상이 포함된 인상적인 프레젠테이션을 YouTube에 게시했습니다.
참조:
온전한 림프절의 림프구 운동성과 항원 반응에 대한 2광자 이미징.
밀러 MJ, 웨이 SH, 파커 I, 카할란 MD. 과학. 2002년 6월 7;296(5574):1869-73. 도이: 10.1126/science.1070051. Epub 2002년 5월 16일.
T 세포 레퍼토리 스캐닝은 림프절의 동적 수지상 세포 행동과 무작위 T 세포 운동성에 의해 촉진됩니다. Miller MJ, Hejazi AS, Wei SH, Cahalan MD, Parker I. Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 1월 27;101(4):998-1003. 도이: 10.1073/pnas.0306407101. Epub 2004년 1월 13일.
림프절의 수지상 세포에 의한 CD4+ T 세포 활성화의 단일 세포 역학을 이미지화합니다.
밀러 MJ, 사프리나 O, 파커 I, 카할란 MD. J Exp Med. 2004년 10월 4;200(7):847-56. 도이: 10.1084/jem.20041236.
16장. 2광자 현미경 및 세포 역학의 다차원 분석.
Zinselmeyer BH, Dempster J, Wokosin DL, Cannon JJ, Pless R, Parker I, Miller MJ.
방법 Enzymol. 2009;461:349-78. 도이: 10.1016/S0076-6879(09)05416-0.
“혁신적인 서비스 계약은 유일한 가동 중지 시간은 문자 그대로 교체 레이저를 내 연구실로 배송하는 시간임을 의미합니다."
— 마크 밀러, 세인트 루이스 워싱턴 대학교 의과대학 부교수
그림 1. WashU IVIC 맞춤형 2광자 시스템
그림 2. 'T 세포 항원 인식'의 생체 내 2광자 이미징은 적응 면역 반응 시작에서 무작위 T 세포 운동성이 수행하는 핵심 역할을 보여줍니다. 경부 림프절의 T 세포(빨간색)는 높은 내피 정맥(분홍색)에서 멀리 이동하여 수지상 세포(녹색, 확대 보기)와 무작위로 접촉합니다.