Krebszellenanalyse – Ein neuer Vektor
Eine Kombination aus Laser-Innovation und durchdachter Instrumentierungs-Innovation ermöglichen ein neues Verfahren mit hohem Durchsatz zum Erlangen von potenziell wichtigen Diagnosedaten zu Brustkrebszellen.
31. 2023년 7월 von 일관적인
Durchflusszytometrie가 아니었나요?
Bei der Durchflusszytometrie werden Zellen oder andere Biopartikel gezwungen, einzeln hindereinander und mit hoher Geschwindigkeit durch eine Interaktionszone zu strömen. Dort treffen sie auf einen oder mehrere fokussierte Laserstrahlen. 결과적으로 laserangeregte Fluoreszenzintensität und häufig auch die Intensität des gestreuten Laserlichts werden für jede Zelle aufgezeichnet. Zählgeräten ermöglicht dies das schnelle Analysieren großer Zellpopulationen, um zum Beispiel festzustellen, welcher Prozentsatz der Zellen einem oder mehreren bestimmten Zelltypen angehört. Instrumenten에서는 die auch das Sortieren ermöglichen, werden die Zellen pro Zieltyp separat gesammelt. Sie werden dazu – wiederum basierend auf der Art von Fluoreszenz/Streuung – mithilfe eines elektrischen Felds in entsprechende Behälter gelenkt.
Die Durchflusszytometrie ist schnell und eignet sich daher für viele Anwendungsgebiete. Medizin häufig zur Analyze von Blutzellen verwendet, wie etwa zum Erstellen kompletter Blutbilder의 모든 내용을 확인하세요. Forschungslaboren und in der Wirkstoffentwicklung eingesetzt und dabei häufig für die Analyze anderer Arten von Säugetierzellen als Blutzellen verwendet의 Wird sie. Gelegentlich werden mit ihr winzige Organismen im Meerwasser untersucht oder auch, um Spermien für die Tierhaltung nach Geschlecht zu sortieren, damit zum Beispiel bei Milchkühen die Geburtenrate weiblicher Tiere erhöht werden kann.
Einsatz von mehr Wellenlängen und von Wellenlängen im Ultraviolettbereich
Zwar 존재 다이 Durchflusszytometrie schon seit Jahrzehnten, doch sie ist ein recht dynamisches Feld. 더 큰 추세는 다중 매개변수-Durchflusszytometrie, bei der bis zu 12 verschiedene Laserwellenlängen verwendet werden, um eine große Anzahl unterschiedlicher Zellparameter zu analyzesieren입니다. Die Laserhersteller unterstützen diesen Trend, indem sie ihre Laser mit neuen Wellenlängen in einem gemeinsamen Format anbieten und mehrere Laser in einer Schlüsselfertigen Laser-Engine unterbringen. (죽어라)OBIS-Produktreihevon 바카라 카지노 steht für beide Entwicklungen.)
Ein weiterer Trend ist der zunehmende Einsatz von Laserwellenlängen im Ultraviolettbereich(UV). Dies ermöglicht, sowohl das Multiparameter-Konzept zu erweitern als auch die Autoflueszenz zu nutzen. Dabei handelt es sich Zellmaterialien, die ohne den Einsatz von Fluoreszenzfarbstoffen oder anderen Zusatzstoffen auf natürliche Weise lumineszieren. Zu diesen Materialien gehören einige wichtige Metabolische Kofaktoren wie NAD(P)H und FAD.
Forscher nutzen die Zeit, um Dinge herauszufinden
In einer früheren바카라 카지노-Erfolgsgeschichtehaben wir beschrieben, wie die Forschungsgruppe um 교수 Jessica Houston(뉴멕시코 주립대학교) Pionierarbeit bei der Entwicklung und Nutzung der zeitaufgelösten Durchflusszytometrie leistet. Wir haben besprochen, warum die Gruppe sich auf NAD(P)H und FAD konzentriert: um Zellen nicht nur zu zählen, sondern auch um deren Stoffwechselzustand zu bestimmen. 휴스턴 박사: "Die meisten Messverfahren der Durchflusszytometrie basieren auf der Intensität der Fluoreszenzsignale. Es können jedoch bei diesem Messverfahren viele Faktoren zu Störungen und Fehlern führen. Dazu zählt auch die Menge des auf der Oberfläche oder im Inneren der Zellen gebundenen Fluorochroms. Wir beschlossen, auch die Abklingzeiten des Fluoreszenzsignals der einzelnen Zellen zu untersuchen. Sie hängt vom chemischen Zustand des Fluorochroms oder des. natürlichen(endogenen) 재료 ab, das die Autoflueszenz verursacht. Endogene Fluoreszenz kann uns einzigartige Informationen über den Stoffwechselzustand von Zellen liefern. Transformerte Zelle, eine Krebszelle, handelt.“
Ihr besonderes Interesse gilt NAD(P)H und FAD, da die Fluoreszenzlebensdauer dieser Kofaktoren anzeigt, ob sie an Proteine gebunden sind oder nicht. Dies wiederum zeigt an, wie die Zelle Zucker zur Energiegewinnung oxyiert. In der Regel sind dies Prozesse, die als 산화성 Phosphorylierung 및 als Glykolyse bezeichnet werden. Viele Krebszellen und andere defekte oder gestörte Zellen weisen hohe Werte an gemessenem freiem, also ungebundenem, NAD(P)H auf. Das deutet darauf hin, dass diese Zellen Energie durch den weniger effizienten Prozess der Glykolyse erzeugen. Das optisch gemessene Mengenverhältnis von FAD zu NAD(P)H wird als Redoxverhältnis bezeichnet. Es zeigt die Stoffwechselaktivität der Zelle an.
Ein geschicktes Verfahren mit CW-Lasern
Um zeitbezogene Daten zu erhalten, nutzte die Gruppe um Dr. Houston zunächst das Pulsen des Laserstrahls. Das Instrument zeichnet dabei das Abklingen des Fluoreszenzpulses auf zwei Arten auf. Entweder als Abklingkurven in Echtzeit, wenn die Laseranregung abgeschaltet wird, oder im Frequenzbereich, wenn der Laser wiederholt mit sehr hoher Geschwindigkeit moduliert wird. Bei letztgenannter Methode nutzte die Gruppe zur Überwachung von FAD einen OBIS-Laser mit einer Wellenlänge von 375 nm. Um jedoch das vollständige Redoxverhältnis genau zu bestimmen, müssen sowohl FAD als auch NAD(P)H gemessen werden. Und um die Abklingzeiten der NAD(P)H-Fluoreszenz unabhängig messen zu können, ist eine noch Tiefer im UV-Bereich liegende Anregung erforderlich – bei etwa 349 nm.
Schlüsselkonzepte der nFLIC-방법. Wenn die Zellen das ungleichmäßige Strahlprofil passieren, steigt und fällt die Fluoreszenz. Die Phasenverzögerung im Vergleich zum Anregungsprofil ist ein direktes Maß der Fluoreszenzlebensdauer. Grafik mit freundlicher Genehmigung des Houston Lab
Kürzlich believeerte 바카라 카지노 die Houstoner Gruppe mit einem neuen OBIS-Modell, das für die Abgabe der Wellenlänge 349 nm entwickelt wurde. Dieser verwendet jedoch eine andere interne Technologie als die 375-nm-Laser und ist nicht so einfach direct zu modulieren. Das war für die Gruppe jedoch kein Problem, denn vor einigen Jahren hatte diese eine durchdachte Technik namens nichtmodulierte Fluoreszenzlebensdauer-Zytometrie (nFLIC) entwickelt. Bei dieser wird zum Bestimmen der durchschnittlichen Fluoreszenzlebensdauer ein Dauerstrichlaser(CW) verwendet.
Abbildung 1 stellt die Funktionsweise dar. Wenn eine Zelle den Fokus passiert, steigt und fällt bei einem Laser mit perfekten TEM00-Ausgangsstrahl die Anregungswahrscheinlichkeit entlang des Gaußschen Strahlprofils. Aber die Abklingzeit der Fluoreszenz ungleich Null verursacht ein Phänomen, das Fluoreszenz-Pulsverzögerung(FPD) genannt wird. Beim Durchgang der Zelle durch den Strahl fällt die Fluoreszenzintensität langsamer ab als das Gaußsche Anregungsprofil. Und das Team um Dr. Houston hat präzise bewiesen, dass die FPD eine gültige Darstellung der durchschnittlichen Fluoreszenzlebensdauer der Zelle ist.
Der neue OBIS 375 hat sich aufgrund seiner überlegenen Ausgangsstrahlqualität im Labor von Dr. Houston sehr got für nFLIC-Studien bewährt. Houston Erklärt 교수: "Erstens liefert er genau die schöne, saubere TEM00-Strahlform, die wir brauchen. Er ist außerdem sehr rauscharm. Und ebenso wichtig: Leistung, Strahlform und Strahlausrichtung sind sehr stable. Das ist wichtig, weil damit die Beziehung zwischen Fluoreszenzpulsabfall und Fluoreszenzlebensdauer mithilfe spezieller fluoreszierender Kügelchen zuverlässig kalibriert werden kann.“."
Resistenz gegen Krebszellen
Krebszellen sind ein ernstzunehmender Gegner, da sie häufig Resistenzen gegen ansonsten wirksame Chemotherapeutika entwickeln. Auf der CYTO 2023 Konferenz(캐나다 몬트리올) bot Samantha Valentino – eine Doktorandin im Labor von Dr. Houston – eine hervorragende Präsentation, die den Wert der zeitaufgelösten Durchflusszytometrie zur Bestimmung von Fluoreszenzlebensdauer und Redoxverhältnissen von FAD/NADH는 Leistungsstarkes Werkzeug zeigte와 같습니다. Es wurde damit die Resistenz von Brustkrebs gegen das Chemotherapeutikum Tamoxifen überwacht.
Raten der Fluoreszenzlebensdauer bei Brustkrebszellen der Typen MCF und T47D – ein Vergleich zwischen empfänglichen und resistance Zelllinien. Grafik mit freundlicher Genehmigung des Houston Lab
Insbesondere erklärte sie, dass Tamoxifen ein weit verbreitetes, gegen Brustkrebs wirksames Medikament mit positiver Östrogenrezeptor-Eigenschaft ist. Es wird verwendet, um Remissionen zu erreichen. Resistenzen entwickeln sich jedoch typischerweise innerhalb von 2 bis 5 Jahren nach Behandlungsbeginn. Valentino stellte zunächst fest, dass das Redoxverhältnis bei 공격적인 Krebszellen, wie etwa denen von arzneimittelresisten Krebsarten, oft stärker verzerrt ist. Sie untersuchte zwei Brustkrebsarten (MCF-7 및 T47D). In beiden Fällen verglich sie Krebszelllinien, die für Tamoxifen empfänglich waren, mit Zelllinien, die gegen Tamoxifen resistance Waren. Abbildung 2는 가장 빠른 다이 Eergebnisse zusammen입니다. Sie zeigt, dass ihr Ansatz einen statistisch signifikanten Unterschied zwischen den empfänglichen und resistance Zelltypen ergab. Es muss nicht ausdrücklich betont werden, dass die Fähigkeit, Krebszellpopulationen schnell auf ihre Resistenzeigenschaften gegen Arzneimittel zu analyzesieren, sich als wichtiges neues Instrument im Arsenal der Krebsbekämpfung erweisen kann: sowohl in der Wirkstoffentwicklung als auch in der Forschung sowie für die Bereitstellung verbesserter Patientenspezifischer Behandlungen.
Zusammenfassung
Auf laserangeregter Fluoreszenz basierende Analysetechniken wie dieDurchflusszytometrie, DNA-Sequenzierungund mikroskopische Gewebebiopsien sind zunehmend wichtigere Instrumente des Trends zu individuell ausgerichteten Behandlungsformen. 트렌드에 따르면, 코로나19 팬데믹이 세계적으로 확산되고 있는 상황입니다. 바카라 카지노 setzt sich stark dafür ein, Fortschritte bei diesen Verfahren mit Laserwerkzeugen für verbesserte Geschwindigkeit und Datenqualität zu unterstützen, die Hürde für den Einsatz senken und die Gesamtkosten der Instrumentierung zu verringern.
