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Becker & Hickl GmbH是光子计数设备的技术领导者, 早些时候已经表明, 小型飞秒光纤激光器可源는 光器可源를 많이 사용합니다. 780 nm, 脉冲频率为 40 MHz 至 80 MHz, 平均功率为 100 mW 至 500 mW, 불仅适用于激发NAD(P)H ，还适用于各种其他荧光团 【1, 2】，包括荧光寿命极短的荧光团 【3, 4, 5】。

因此，Becker & Hickl 有兴趣了解축삭飞秒光纤激光器에서 这些应用中性能.

그림 1：바카라 카지노 Axon 780 飞秒激光器

 

系统架构

작동한 bh DCS-120 MP 多光子 FLIM 系统。该系统 tive 架构如图 2 所示。 

Axon 780 激光器的激光器激光束入 DCS-120扫描头。지금 扫描头内부,它被两个快速振镜偏转。扫描头的扫描透镜将激光束投射到显微镜中。지금 显微镜内部，光束穿过五向color分束器，并投影到显微镜透镜的后孔上。显微镜물透镜将光束聚焦到样product内材图image平face中。当光束被振镜偏转时，激光激光器聚焦光栅扫描会在样product中的图image区域上方进行。

 

为了获得最大 공간 间分辨率, 激光束必须完全填充显微镜透镜的后孔径。对于扫描和管透镜的似常焦距，情况并不自动发生。因此，光束在进入扫描仪の前会扩距1.5 倍。后孔中的光直径约为12mm, 매우 큰 크기의 12mm. 。激发功率的激关损失是可以容忍的，因为激光器提供的功率远远超过所需的功率。

从样品中收集荧光，通过显微镜透镜返回，然后通过非去扫描光束路径馈送。L1 和 L2 形成望远镜。望远镜还收集显微镜透镜未完全准直的光子，例如散射在厚样品之外的光子。荧光被分成两个波长间隔，并通过两个 bh HPM-100-40 混合检测器进行检测 【6， 7】。检测器的单光子脉冲记录在两个 SPC-180N TCSPC / FLIM 模块中 【1】。SPC-180N 模块确定激发脉冲后光子的检测时间和扫描仪在光子检测时的位置。此信息用于构建 FLIM 图像。这些是像素阵列，每个像素在大量时间通道中都包含完整的荧光衰减曲线 【1】。

反激激激激光束와 光消隐的扫描由 bh GVD-140 扫描控由器卡进行硬件控控由。激光强島控由濇Axon激光器의 AOM은 GVD-140을 사용하여 SPCM을 사용합니다.运行，提供具有扫描仪控控管、激光器控管、数据采集 and数据分析功能的完全集成 FLIM 系统。FLIM 系统 tive 用户界 面妾 3所示。

그림 3：SPCM 数据采集和控조제형 주화면板

 

结果

使用 DCS-120-AXON 组拍摄的 FLIM 图image如图 4 至图 6 所示.所有图image均使用 40x，NA= 1.3 的油浸透镜。使用bh SPCImage NG FLIM 数据分析套件进行数据分析。图 4 和图 5 显示了平均（振幅加权）寿命 和代谢指标 a1 的颜color编码 FLIM图image。右上方显示了所选图image参数（tm 或a1) 的直方图，右下方显示了光标位置的衰减曲线。所选光斑的衰减参数显示得不常右。

그림 4：猪皮、NADH 图image、双指数衰减的振幅加权平均寿命

 

图 5：猪皮、NADH 图image、振幅、a1、快速衰变成分。a1 是代谢状态的指标

 

图 6 显示了酵母细胞.选择发射滤光文来检测 440 至 470  nm,从而将光谱范围限测测NAD(P)H. 470 nm 적광률, 必须限 제어는 470 nm에서 FAD 와 FMN 荧光, 必须限格.以下입니다. NAD(P) H 一起被激发, 但对代谢状态表现는 서로 다른 유형입니다. SPCImage NG 的 MLE算指数衰减参数。所示图image显示a1,即快速衰减分振幅.它表示未结合 NAD(P)H 의 数weight.也称为“代谢指标”【1】。

 

可以看流，a1 은 不同细胞中明显不同. a1(显示为蓝color)表示新陈代谢更糖酵解，低 a1(黄color)表示更氧化。

 

“我们已经证明，바카라 카지노 高意 Axon 780 飞秒光纤激光器与 bh 的精确扫描仪光学元件器件、探测器、TCSPC / FLIM 电子器件和数据分析软件相结合，可提供有关活细胞和组织代谢的准确信息。”凭借其基于 AOM 的内部强島控 조절 ，激光器可以顺利集成到 bh 的 SPCM FLIM采集软件中.이것은 光束停止情况과扫描仪反激阶段以及可重现的强島控可,光束消隐可保护样제품免受局부빛损伤。总而言之，DCS-120 MP / Axon 780组合是一种易于使用 高分辨率, 高灵敏德双光子激光扫描 FLIM 显微镜。 

 

参考文献

1. W. Becker， bh TCSPC 手册。第 10 版。Becker & Hickl GmbH（2023 年），可在 www.becker-hickl.com 上获取， 打印副本从 bh 起提供
2. W. 베커、C. 융한스, H. Netz는 FLIM의 带飞秒光纤激光器的双光子 FLIM을 사용합니다. www.becker-hickl.com 上获取
3. W. 베커、C. 융한스、A. Bergmann、蘑菇孢子双光子 FLIM 揭示超快衰变组件。应用说ming（2021 年），网址：www.becker-hickl.com
4. W. 베커、A. 버그만、C. Junghans、天然类胡萝卜素中的超快荧光衰减。应用说明，www. becker-hickl.com (2022)
5. W. 베커、C. 융한스, V. Shcheslavskiy、高分辨率多光子 FLIM 揭示了人类头发中的超快荧光衰变。应用说ming，www. becker-hickl.com (2023)
6. W. 베커、B. 수、K. 바이샤트、O. Holub、FLIM 과 FCS 激光扫描显微镜检测：GaAsP 混合探测器提高效率。Micr. 分辨率 技术 74, 804-811 (2011)
7. Becker & Hickl GmbH, 混합探测器 및 MCP-PMT 의 IRF 宽titudeSub-20ps.应用说明，可 여기 www.becker-hickl.com 上获取