Coherent 인터넷 바카라사이트 780 파이버 인터넷 바카라사이트를 사용한 2광자 대사 FLIM

광자 계수 장비 분야의 기술 리더인 인터넷 바카라사이트 & Hickl GmbH는 이전에 소형 펨토초 파이버 인터넷 바카라사이트를 다광자 형광 이미징 시스템의 저렴한 여기 소스로 사용할 수 있음을 보여주었습니다. 방출 파장이 780nm, 40MHz~80MHz 펄스 속도, 평균 출력이 100mW~500mW인 인터넷 바카라사이트는 NAD(P)H 여기뿐만 아니라 형광 수명이 매우 짧은 형광단을 포함한 다양한 기타 형광단[1, 2]에도 적합합니다[3, 4, 5].

따라서 인터넷 바카라사이트 & Hickl은 바카라 사이트 추천디시 - Fixed Wavelength Ultrafast Oscillators | Cohe바카라 사이트 추천디시nt 펨토초 파이버 인터넷 바카라사이트가 이러한 응용 분야에서 어떤 성능을 발휘할지 알고 싶었습니다.

그림 1: Coherent 인터넷 바카라사이트 780 펨토초 인터넷 바카라사이트

 

시스템 아키텍처

테스트 시스템으로 bh DCS-120 MP 다광자 FLIM 시스템을 사용했습니다. 이 시스템의 구조는 그림 2에 나와 있습니다. 

인터넷 바카라사이트 780 인터넷 바카라사이트의 인터넷 바카라사이트 빔은 자유 빔을 통해 DCS-120 스캔 헤드에 주입됩니다. 인터넷 바카라사이트 스캔 헤드 내부에는 2개의 고속 검류계 미러가 휘어집니다. 스캔 헤드의 스캔 렌즈는 인터넷 바카라사이트 빔을 현미경으로 투사합니다. 현미경 내부에서 빔은 이색 빔 스플리터를 통과하여 현미경 렌즈의 후면 조리개에 투영됩니다. 현미경 대물 렌즈는 빔을 샘플 내부의 이미지 평면에 초점을 맞춥니다. 빔이 검류계에 의해 편향되면 샘플의 이미지 영역에 대한 인터넷 바카라사이트 초점 래스터 스캔이 미러링됩니다.

 

공간 해상도를 극대화하려면 인터넷 바카라사이트 빔이 현미경 렌즈의 후면 조리개를 완전히 채우는 것이 중요합니다. 스캔 및 튜브 렌즈의 일반적인 초점 길이로 인해 자동으로 그렇지 않습니다. 따라서 빔은 스캐너에 들어가기 전에 1.5배까지 확장됩니다. 후면 조리개 내 빔 직경은 약 12 mm로 가장 큰 현미경 렌즈의 조리개를 채우기에 충분합니다. 애퍼처를 과도하게 채우는 것은 문제가 없습니다. 인터넷 바카라사이트가 필요 이상으로 훨씬 더 많은 출력을 제공하기 때문에 여기 출력의 관련 손실은 견딜 수 있습니다.

샘플에서 나오는 형광은 현미경 렌즈 통해 다시 수집되고 비절삭 빔 경로를 통해 공급됩니다. L1과 L2는 페리스코프를 형성합니다. 또한 페리스코프는 현미경 렌즈로 완벽하게 시준되지 않은 광자를 수집합니다. 예를 들어 두꺼운 샘플에서 나오는 도중에 산란된 광자도 수집됩니다. 형광광은 두 파장 간격으로 분할되고 두 개의 bh HPM-100-40 하이브리드 검출기로 감지됩니다[6, 7]. 검출기의 단일 광자 펄스는 2개의 SPC-180N TCSPC/FLIM 모듈에 기록됩니다[1]. SPC-180N 모듈은 여기 펄스 후 광자의 감지 시간과 광자 감지 순간의 스캐너 위치를 결정합니다. 이 정보는 FLIM 이미지를 구축하는 데 사용됩니다. 이는 픽셀 배열이며, 각 픽셀은 많은 시간 채널에서 전체 형광 감쇠 곡선을 포함합니다[1].

플라이백 단계에서 인터넷 바카라사이트 빔 및 빔 블랭킹을 스캔하는 것은 bh GVD-140 스캔 컨트롤러 카드로 하드웨어 제어됩니다. 인터넷 바카라사이트 강도 제어는 인터넷 바카라사이트 인터넷 바카라사이트의 AOM 제어 신호 입력을 통해 수행됩니다. 이 신호는 GVD-140 카드에서도 제공됩니다. 전체 시스템은 bh의 SPCM 데이터 수집 및 제어 소프트웨어[1]에 의해 작동되며 스캐너 제어, 인터넷 바카라사이트 제어, 데이터 수집 및 데이터 분석을 갖춘 완전 통합 FLIM 시스템을 제공합니다. FLIM 시스템의 사용자 인터페이스는 그림 3에 나와 있습니다.

그림 3: SPCM 데이터 획득 및 제어 소프트웨어의 메인 패널

 

결과

DCS-120-AXON 조합으로 촬영한 FLIM 이미지는 그림 4~그림 6에 나와 있습니다. 모든 이미지에 40x, NA= 1.3 유침 렌즈 사용했습니다. 데이터 분석은 bh SPCImage NG FLIM 데이터 분석 제품군을 사용하여 수행되었습니다. 그림 4와 그림 5는 평균(진폭 가중) 수명과 대사 지표 a1의 색상 코드 FLIM 이미지를 보여줍니다. 선택한 이미지 매개변수(tm 또는 a1)의 히스토그램이 오른쪽 상단에 표시되고 커서 위치의 감쇠 곡선이 오른쪽 하단에 표시됩니다. 선택한 지점의 디케이 매개변수가 맨 오른쪽에 표시됩니다.

그림 4: 돼지 피부, NADH 이미지, 진폭 가중 평균 이중 지수 붕괴 수명

 

그림 5: 빠른 붕괴 성분의 돼지 피부, NADH 이미지, 진폭, a1. a1은 인터넷 바카라사이트 상태의 지표입니다.

 

도 6은 효모 세포를 보여준다. 방출 필터는 440nm에서 470 nm까지 검출하도록 선택되었으므로 스펙트럼 범위가 NAD(P)H의 검출로 제한됩니다. 470 nm의 상한 검출 한계는 매우 제한적인 것처럼 보일 수 있습니다. 그러나 FAD 및 FMN 형광의 검출을 방지하려면 470 nm 미만으로 제한해야 합니다. 이러한 화합물은 NAD(P)H와 함께 여기되지만 대사 상태에 따라 다르게 나타납니다. SPCImage NG의 MLE 알고리즘으로 데이터를 분석하여 이미지의 개별 픽셀에 고정밀 이중 지수 감쇠 매개변수를 제공했습니다. 표시된 이미지는 빠른 붕괴 구성 요소의 진폭인 a1을 표시합니다. 비결합 NAD(P)H의 양을 나타냅니다. 결합/비결합 비율이 대사에 따라 변하기 때문에 a1은 '대사 지표'라고도 합니다[1].

 

알 수 있듯이 a1은 세포마다 분명히 다릅니다. 이는 세포마다 인터넷 바카라사이트 상태가 다르다는 것을 나타냅니다. 높은 a1(파란색으로 표시됨)은 인터넷 바카라사이트가 더 당화됨을 나타내고, 낮은 a1(노란색)은 더 산화적임을 나타냅니다.

 

'Coherent 인터넷 바카라사이트 780 펨토초 파이버 인터넷 바카라사이트는 bh의 정밀도 스캐너 인터넷 바카라사이트 장치, 검출기, TCSPC / FLIM 전자 장치 및 데이터 분석 소프트웨어와 결합하여 살아있는 세포 및 조직의 대사에 대한 정확한 정보를 제공하는 것으로 입증되었습니다.' 내부 AOM 기반 강도 제어를 통해 인터넷 바카라사이트는 bh의 SPCM FLIM 획득 소프트웨어에 원활하게 통합됩니다. 빔 정지 상황에서 빔 블랭킹과 스캐너 플라이백 단계 및 재현 가능한 강도 제어는 샘플을 국소 광손상으로부터 보호합니다. 전체적으로 DCS-120 MP / 인터넷 바카라사이트 780 조합은 사용하기 쉬운 고해상도, 고감도, 2광자 인터넷 바카라사이트 스캐닝 FLIM 현미경입니다. 

 

참고 문헌

1. W. Becker, The bh TCSPC 핸드북. 제10판. 인터넷 바카라사이트 & Hickl GmbH(2023), www.becker-hickl.com 이용 가능,  인쇄본은 bh에서 이용 가능
2. W. Becker, C. Junghans, H. Netz, 펨토초 파이버 인터넷 바카라사이트가 있는 2광자 FLIM. 애플리케이션 노트, www.becker-hickl.com 참조
3. W. Becker, C. Junghans, A. Bergmann, 버섯 포자의 2포톤 FLIM, 초고속 디케이 구성 요소 공개. 애플리케이션 노트(2021), www.becker-hickl.com 이용 가능
4. W. Becker, A. Bergmann, C. Junghans, 천연 카로티노이드의 초고속 형광 감쇠. 응용 분야 노트, www. becker-hickl.인터넷 바카라사이트m(2022)
5. W. Becker, C. Junghans, V. Shcheslavskiy, 고해상도 다광자 FLIM, 인간의 모발에서 초고속 형광 붕괴 공개. 응용 분야 노트, www. becker-hickl.com(2023)
6. 인터넷 바카라사이트 스캐닝 현미경에서 W. Becker, B. Su, K. Weisshart, O. Holub, FLIM 및 FCS 검출: GaAsP 하이브리드 검출기로 효율성 향상. Micr. Res. 기술자 74, 804-811(2011)
7. 인터넷 바카라사이트 & Hickl GmbH, 하이브리드 검출기 및 MCPSub-20ps IRF 폭. 애플리케이션 노트, www.becker-hickl.com 참조