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광자 전용 장비 분야의 기술 리더인 Becker & Hickl GmbH는 이전에 소형 펨토초 파이버 레이저를 다광자 형광 시스템의 저렴한 여기에 소스로 사용할 수 있음을 보여줍니다. 방사능이 780nm, 40MHz~80MHz 속도, 중간 출력이 100mW~500mW인 레이저는 NAD(P)H 여기뿐만 아니라 형광 생활이 매우 짧은 형광단을 포함한 기타 형광단[1, 2]에도 적합합니다[3, 4, 5].

따라서 Becker & Hickl은축삭펨토초 파이버 서보가 이러한 응용 프로그램 분야에서 어떤 성능을 발휘할 수 있는지 알려드립니다.

그림 1: 바카라 카지노 Axon 780 펨토초 레이저

 

시스템 조정

테스트 시스템으로 bh DCS-120 MP 다광자 FLIM 시스템을 사용했습니다. 이 시스템의 구조는 그림 2에 접속되어 있습니다. 

Axon 780 레이저의 손잡이는 DCS-120 스캔 헤드를 통해 조정됩니다. 고성능 스캔 헤드 내부에는 2개의 검류계 미러가 나타납니다. 스캔 헤드의 스캔 렌즈는 프린터를 교체하는 데 사용됩니다. 클립 내부에서 손잡이는 이색 손잡이 스플리터를 통과하여 클립 렌즈의 후면 부분에 위치합니다. 클립 대물 렌즈는 반사를 위해 내부의 이미지를 조정하기 위해 초점을 맞췄습니다. 반대이 검류계에 의해 편향 샘플의 이미지 지역에 대한 레이저 초점 스캔이 미러링됩니다.

 

공간을 축소하기 위해 재활용 캐비닛 렌즈의 후면을 완전히 표시하는 것이 중요합니다. 스캔 및 튜브 렌즈의 일반적인 초점 길이로 인해 자동으로 그렇지 않습니다. 따라서 확장은 검색에 들어가기 전에 1.5배까지 확장됩니다. 초점 내부 직경은 약 12mm로 가장 큰 카메라 렌즈의 초점 거리에 제한이 없습니다. 애퍼처를 추가로 설명하는 것은 문제가 없습니다. 고대가 필요로 하는 것보다 훨씬 더 많은 출력을 제공하기 때문에 여기 출력의 관련성이 낮은 것은 있을 수 있습니다.

샘플에서 받는 형광은 렌즈를 통해 다시 수집하고 비절삭 처리 경로를 통해 공급됩니다. L1과 L2는 망원경을 형성합니다. 또한 관측용 망원경은 렌즈로 뚜렷하게 시준되지 않은 사진을 수집합니다. 예를 들어 많은 사람들로부터 멀리 떨어진 곳에서 산란된 광자도 수집됩니다. 형광은 두 개의 프로세서로 분리하여 두 개의 bh HPM-100-40 프로세서로 감지됩니다[6, 7]. 검출기의 단일 광자는 2개의 SPC-180N TCSPC/FLIM 모듈에 기록됩니다[1]. SPC-180N은 광자의 감지 시간과 광자 순간의 감지 위치를 결정합니다. 이 정보는 FLIM 이미지를 구축하는 데 사용됩니다. 이는 배열 배열이며, 각 배열은 많은 시간 채널에서 전체 형광 센서 배열을 포함합니다[1].

플라이백 단계에서 알파벳 순서 및 블랭킹을 검색하는 것은 bh GVD-140 푸시 컨트롤러 카드로 하드웨어 제어입니다. 샤프트의 AOM 제어 신호를 통해 차세대 제어가 이루어집니다. 이 신호는 GVD-140 카드도 제공됩니다. 전체 시스템은 bh의 SPCM 데이터 수집 및 제어 소프트웨어[1]에 의해 작동 제어, 제어, 데이터 수집 및 데이터 분석을 제공하는 완전 통합 FLIM 시스템을 제공합니다. FLIM 시스템의 사용자 인터페이스는 그림 3에 사용됩니다.

그림 3: SPCM 데이터 획득 및 제어 소프트웨어의 메인 패널

 

결과

DCS-120-AXON 조합으로 촬영한 FLIM 이미지는 그림 4~그림 6에 접속되어 있습니다. 모든 이미지에 40x, NA= 1.3 유침 렌즈를 사용했습니다. 데이터 분석은 bh SPCImage NG FLIM 데이터 분석 제품군을 사용하여 수행되었습니다. 그림 4와 그림 5는 평균(진폭 가중) 생활과 표시 지표 a1의 색상 코드 FLIM 이미지를 표시합니다. 선택 이미지 별도 선택(tm 또는 a1)의 히스토그램이 오른쪽 상단에 표시되고 연결 위치의 쇠쇠 블록이 오른쪽 하단에 표시됩니다. 선택 항목의 선택 항목별로 여러 개가 오른쪽에 표시됩니다.

그림 4: 돼지 피부, NADH 이미지, 붕괴 가중 중간 지수 붕괴 수명

 

그림 5: 빠른 붕괴의 돼지 피부, NADH 이미지, 분해, a1. a1은 대사상태의 지표입니다.

 

도 6은 세포를 관찰합니다. 방출 낚시는 440nm에서 470nm까지 탐지하도록 선택적으로 스펙트럼 범위가 NAD(P)H의 탐지로 제한됩니다. 470nm의 상한 검출은 매우 제한적인 것처럼 보일 수 있습니다. 그러나 FAD 및 FMN 형광의 검출을 방지하려면 470nm를 제외하고 제한해야 합니다. 이러한 화합물은 NAD(P)H와 여기에서 전송 상태에 따라 서명된 내용입니다. SPCImage NG의 MLE 범위로 데이터를 분석하여 이미지의 개별 문자에 고정밀 더블 지수 감쇠 특정 항목을 제공했습니다. 나루토는 빠른 붕괴 구성 요소의 붕괴인 a1을 표시합니다. 비결합 NAD(P)H의 양을 제거합니다. 축소/비조합이 대사에 따라 변하기 때문에 a1은 '대사 표시'를 해야 합니다[1].

 

알 수 있듯이 a1은 세포마다 추가적으로 제외됩니다. 자체적으로 움직이며 상태를 변경하는 것을 제외합니다. a1(파란색으로 표시됨)은 하위 전송가 더 많은 것을 나타내기 위해, a1(노란색)은 더 산화적임을 의미합니다.

 

'바카라 카지노 Axon 780 펨토초 파이버 레이저는 bh의 다양한 각도 광학 장치, 검출기, TCSPC / FLIM 전자 장치 및 데이터 분석 소프트웨어와 결합하여 생체 세포 및 조직의 대사에 대한 정보를 제공하는 업체임을 입증했습니다.'내부 AOM 기반의 무제한 제어를 통해 홀로그램은 bh의 SPCM FLIM 획득 소프트웨어에 관련되게 통합됩니다. 엑서스 정지 상황에서 블랭킹과 플라이백 핸들링 및 지속성을 갖춘 강력한 제어는 사용자를 위한 도구 광손상으로부터 보호합니다. 전체적으로 DCS-120 MP / Axon 780 통합은 사용하기 쉽습니다 고해상도, 고감도, 2광자 레이저 스캐닝 FLIM 현미경입니다. 

 

참고문헌

1. W. Becker, The bh TCSPC 핸드북. 제10판. Becker & Hickl GmbH(2023), www.becker-hickl.com 이용 가능, 인쇄본은 bh에서 이용 가능
2. W. Becker, C. Junghans, H. Netz, 펨토초 파이버가 있는 2광자 FLIM. 법적 근거, www.becker-hickl.com 참조
3. W. Becker, C. Junghans, A. Bergmann, 포자의 2포톤 FLIM, 초고속 디케이 구성 요소 표시. 접점(2021), www.becker-hickl.com 이용 가능
4. W. Becker, A. Bergmann, C. Junghans, 천연 카로티노이드의 초고속 형광 감쇠. 응용분야 분야, www. becker-hickl.com(2022)
5. W. Becker, C. Junghans, V. Shcheslavskiy, 고해상도 다광자 FLIM, 인간의 모발에서 초고속 형광 표시. 응용분야 분야, www. becker-hickl.com(2023)
6. 레이저 스캐닝 현미경에서 W. Becker, B. Su, K. Weisshart, O. Holub, FLIM 및 FCS 발견: GaAsP 하이브리드로 인해 유용합니다. 마이크. 결의안. 74, 804-811(2011)
7. Becker & Hickl GmbH, 하이브리드 검출기 및 MCPSub-20ps IRF 폭. 법적 근거, www.becker-hickl.com 참조